Tagmentase (Tn5 transposase) – loaded

Hologic Diagenode Tagmentase – Loaded è una trasposasi Tn5 iperattiva e altamente efficiente, precaricata con adattatori di sequenziamento compatibili con Illumina. Combinando il taglio del DNA e l’inserimento dell’adattatore in un unico passaggio, semplifica e ottimizza i flussi di lavoro per le applicazioni di sequenziamento di nuova generazione (NGS). Questo prodotto è perfettamente compatibile con tecnologie come ATAC-seq, ChIPmentation, tagmentazione del DNA genomico e altri metodi NGS, offrendo prestazioni affidabili ed efficienza ottimizzata.

Novità! Formulazione standardizzata in Unità

Per garantire prestazioni costanti su diversi lotti, abbiamo introdotto una formulazione unitaria (U) standardizzata. Questo garantisce risultati di alta qualità con ogni acquisto.

Informazioni di Prodotto

Hologic Diagenode Tagmentase – loaded è una trasposasi Tn5 iperattiva precaricata con adattatori di sequenziamento compatibili con Illumina. La sua capacità di tagliare il DNA e inserire gli adattatori di sequenziamento in un unico passaggio la rende il compagno perfetto per gli esperimenti di sequenziamento di nuova generazione. La Tagmentase è precaricata con adattatori di sequenziamento compatibili con le piattaforme Illumina Nextera, come mostrato di seguito. Gli oligonucleotidi caricati sulla Tagmentase vengono inseriti nel DNA tramite una reazione di tagmentazione.

• Mosaic end_reverse: 5’ [PHO]CTGTCTCTTATACACATCT 3’
• Mosaic end_Adapter A: 5’ TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG 3’
• Mosaic end_Adapter B: 5’ GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG 3’

Le regioni sottolineate corrispondono alla parte a doppio filamento dell’adattatore riconosciuta dalla Tagmentasi. Le librerie finali possono essere amplificate utilizzando gli indici di primer Hologic Diagenode per librerie tagmentate:

• 24 UDI for tagemented libraries – Set I
• 24 UDI for tagmented libraries – Set II
• 24 UDI for tagmented libraries –  Set III

Definizione di Unità

Un’unità di Tagmentasi (Tn5 Transposasi) caricata è definita come la quantità di enzima necessaria per scindere 30 ng del plasmide pUC19 linearizzato in 1 ora a 37 °C, generando librerie con una dimensione media dei frammenti inferiore a 550 bp in condizioni standard.

Condizioni di conservazione

Conservare a -20°C.  Stabilità garantita per sei mesi dalla data di ricezione se conservato correttamente.

Tampone di conservazione

Fornito in una soluzione contenente glicerolo al 50% (v/v).

Proprietà e utilizzo

• Dipendenza dal magnesio: la tagmentasi richiede Mg²+ per essere attiva. Evitare chelanti (ad es. EDTA, EGTA) nei tamponi di reazione.
• pH e temperatura: l’enzima è attivo a pH 7,5–8 e 37–55 °C.
• Inattivazione: SDS, EDTA/EGTA o riscaldamento a 65 °C inattiveranno l’enzima.

Tamponi Raccomandati

• Tagmentase Dilution Buffer – Hologic Diagenode, Cat. No. C01070011
• Tagmentation Buffer (2x) – Hologic Diagenode, Cat. No. C01019043 – dilute 2x before use

Applicazioni

La tagmentasi (Tn5 transposasi) caricata può essere utilizzata in un’ampia gamma di applicazioni per creare librerie per il sequenziamento di nuova generazione. Le quantità raccomandate per reazione sono le seguenti:

• Genomic DNA tagmentation: 0.25–1 U per 25–100 ng of DNA
• ATAC-seq: 0.3 U per 50,000 cells
• ChIPmentation: 0.125 U per reaction

Si prega di notare che per i protocolli personalizzati potrebbe essere necessaria un’ulteriore ottimizzazione, compresi esperimenti sulla dose enzimatica e sulla risposta temporale.

Protocolli Raccomandati

Per ATAC-seq e ChIPmentation, consigliamo di utilizzare protocolli Hologic Diagenode convalidati:

• ATAC-seq Kit – Hologic Diagenode, Cat. No. C01080002
• ChIPmentation Kit for Histones – Hologic Diagenode, Cat. No. C01011009
• μChIPmentation Kit for Histones – Hologic Diagenode, Cat. No. C01011011
• TAG Kit for ChIPmentation – Hologic Diagenode, Cat. No. C01011030

Controllo Qualità

Ogni nuovo lotto di Tagmentase viene sottoposto a un controllo di qualità completo per garantirne la conformità alle specifiche designate. Vengono eseguiti i seguenti test:

• Purezza e integrità delle proteine ​​mediante SDS-PAGE
• Attività nucleasica per confermare l’assenza di attività DNasica aspecifica
• Attività enzimatica transposasica mediante un test di scissione pUC19 e relativa preparazione della libreria
• Funzionale mediante ATAC-seq, inclusi i controlli per DNA contaminante da E. coli

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