siRNA Duplex Controlli
La più facile ed efficiente soluzione per raggiungere RNAi è utilizzare piccoli RNA di sintesi di interferenza (siRNA). I siRNA standard sono duplex di piccoli oligonucleotidi mischiati. Hanno una lunghezza tipica di 19 nucleotidi con 2 oligonucloetidi simmetrici (normalmente basi DNA) di overhangs.
Come per tutti gli esperimenti, sono necessari controlli positivi e negativi
Possono essere utilizzati due tipi di controlli negativi. In primo luogo, può essere eseguito un esperimento parallelo con una sequenza scrambled del siRNA di interesse. E ‘anche possibile effettuare questo controllo con un siRNA contenente da uno a tre disallineamenti nella sequenza di interesse. Questo controllo permette di verificare la specificità del siRNA di interesse. In secondo luogo, è possibile utilizzare una sequenza perfettamente unica che non dovrebbe corrispondere a nessuna sequenza nel genoma di interesse; questo per mostrare la correlazione tra il siRNA di interesse e l’effetto di silenziamento. Si consiglia di utilizzare questo controllo negativo in ogni esperimento.
I controlli positivi sono necessari per dimostrare la validità del principio e per garantire che la qualità dell’esperimento sia adatta anche per eseguire un test RNAi . Inoltre consentono di normalizzare il risultato ottenuto. Per effettuare questo controllo, sono principalmente utilizzate alcune sequenze convalidate e pubblicate.
Il controllo negativo è costituito da siRNA che non presenta alcuna omologia con qualsiasi gene eucariota noto. Il controllo siRNA è già anilato e spedito liofilizzato. La sequenza proposta è correttamente convalidata.
I controlli positivi consistono in siRNA diretti contro una serie di geni endogeni e geni reporter e sono disponibili in quantità finali di 5, 10 e 20 nmol . Ogni controllo contiene 1 siRNA duplex. Tutti i duplex di controllo sono purificati PAGE e controllati al 100% con spettrometria di massa MALDI-TOF. Le sequenze proposte sono validate e pubblicati.
| # | Codice | Descrizione | Qty |
| 1 | SR-CL000-005 | Control siRNA duplex negative control | 5 nmol |
| 2 | SR-CLIV000-005 | Control siRNA duplex negative control in vivo | |
| 2 | SR-CL001-005 | Control siRNA duplex LaminB1 (human) | 5 nmol |
| 3 | SR-CL002-005 | Control siRNA duplex Vimentin (human) | 5 nmol |
| 4 | SR-CL003-005 | Control siRNA duplex NuMA (human) | 5 nmol |
| 5 | SR-CL004-005 | Control siRNA duplex Beta-actin (human) | 5 nmol |
| 6 | SR-CL005-005 | Control siRNA duplex Eg-5 (human) | 5 nmol |
| 7 | SR-CL006-005 | Control siRNA duplex Cdk-1 (human) | 5 nmol |
| 8 | SR-CL0010-005 | Control siRNA duplex pGL2 luciferase (firefly) | 5 nmol |
| 9 | SR-CL0011-005 | Control siRNA duplex pGL3 luciferase (firefly) | 5 nmol |
| 10 | SR-CL0020-005 | Control siRNA duplex GFP (jellyfish) | 5 nmol |
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