Double Dye Probes

Double Dye Probes: hanno un colorante reporter fluorescente e un quencher alle loro estremità 5 ‘e 3’  rispettivamente. Gli oligonucleotidi Double Dye  sono progettati per legarsi tra i primer PCR a monte e a valle. La Tm della sonda Double Dye deve essere superiore a quella del primer a monte, per evitare una situazione in cui il primer successivo è già stato esteso mentre la sonda Double Dye non si è ancora legata.

3′ TAMRA Double Dye Probes 3′ Black Hole™ Quencher Double Dye Probes 3′ Eclipse® Dark Quencher Double Dye Probes 3′ DDQI or DDQ2 Double Dye Probes 3′ QXL® Double Dye Probes

Durante il processo di amplificazione, l’attività esonucleasica Taq DNA polimerasi libera il fluoroforo dalla sonda. Poiché il fluoroforo non è più sottoposto a quenching FRET, comincia a fluorescenza. Questa fluorescenza può essere misurata, e il livello è direttamente proporzionale alla quantità di DNA bersaglio accumulato durante la reazione di PCR.

Tutti gli oligonucleotidi Double Dye sono purificati HPLC. Sono controllati mediante HPLC analitica e spettrometria di massa MALDI-TOF. Gli oligonucleotidi sono forniti liofilizzato in singoli tubi. La lunghezza consigliata ottimale di sonde Double Dye è di 25 basi. La loro lunghezza massima è di 35 basi. In caso di sonde Double Dye necessariamente più lunghe, quenchers come Black Hole QuencherTM, Deep Dark Quencher I e TAMRA possono essere accoppiati internamente.

LNA® Double-Dye probes

Rispetto alle sonde DNA Double-Dye, le sonde LNA® Double-Dye presentano stabilità termica, specificità e riproducibilità più elevate. Mostrano una migliore discriminazione del mismatch che consente l’uso di sonde più corte.

Inoltre, l’LNA® offre la possibilità di regolare i valori di Tm di primer e sonde in saggi multiplex.

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Note Legali: per solo uso ricerca

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